人elisa檢測試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）水平。用純化的人遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加高遷移率族蛋白B1（HMGB-1），再與HRP標記的高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體結合形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高遷移率族蛋白B（HMGB-1）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算品中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）濃度。
ELISA測定結果分為定量和定性兩大類。
1、定量測定則是對比昂本中待測抗原的多少進行量值測定，一具體數(shù)值表示。它是用于非病原體抗原物質的測定。如激素，細胞因子，腫瘤標志物，小分子藥物等。定量測定的“量值”依據(jù)是試劑盒中所帶標準品同時測定得出的劑量反應曲線(又稱標準曲線)。
2、定性測定只是對標本中是否含有待測定抗原或抗體做出“有”或“無”的結論，分別用“陽性”和“陰性”來表示。通常是用于傳染性病原體的抗原或抗體的測定，以判斷特定病原體感染的存在與否。定性測定的“陽性”和“陰性”的判定依據(jù)必須是試劑盒所確定的陽性判定值。以前很多基層實驗室均使用衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應的弱陽性定值質控血清的測定吸光度來判定結果，高于其判為陽性，反之為陰性，而不管試劑盒CUT-OFF值如何。
1、試劑盒使用前請保存在2-8℃。復溶后的標準品若未用完，請廢棄。
2、微量試劑運輸中顛簸和可能的倒置，會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請1000轉/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3、從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正常現(xiàn)象，微加熱至40℃使結晶*溶解后再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應為室溫。
4、不同批號的試劑盒組份避免混用（洗滌液和反應終止液除外）。
5、充分輕微混勻對反應結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應孵育前手工輕輕混勻。
6、在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。
7、試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴禁在不同的液體之間混用！否則將影響試驗結果。
8、試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標本時，請按國家生物試驗室安全防護條列執(zhí)行。
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