通常我們可用于犬elisa檢測試劑盒的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步，下面簡單介紹一下。
1、細胞培養(yǎng)上清：
取細胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
2、細胞裂解液：
a、吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。
b、收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
c、加入適量的預(yù)冷PBS或細胞裂解液重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
d、將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。
3、血清：
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜，使血清析出。4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
采血過程中應(yīng)避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的犬elisa檢測試劑盒中會有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。同時也應(yīng)避免細菌污染，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。
4、血漿：
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應(yīng)仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
在犬elisa檢測試劑盒中除了包被外，一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時應(yīng)該使用相同口徑的滴管，保持準(zhǔn)確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應(yīng)力求準(zhǔn)確。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制。加樣時應(yīng)將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出現(xiàn)氣泡。
在線客服
電話咨詢
